冠心宁片对胰岛素抵抗西藏小型猪模型的干预作用*
汪 晶 施佳君 潘永明 朱科燕 陈 诚 陈民利 陈方明#
1 杭州市第一人民医院城北院区 浙江 杭州 310022
2 浙江中医药大学中医药科学院 浙江 杭州 310053
3 浙江省中医药研究院实验动物中心 浙江 杭州 310007
胰岛素抵抗（IR）被证实是糖尿病患者心血管疾病的重要触发因素之一[1]。临床资料显示，IR对心血管疾病的促进作用比糖尿病本身的危险更大，是肥胖、高血压、动脉粥样硬化性心血管疾病和代谢综合征共同的病理基础[2]。冠心宁片是丹参、川芎按1∶1配伍组成的复方制剂，具有活血化瘀、通脉养心之功效，用于治疗冠心病稳定型劳累性心绞痛，临床疗效确切，安全性高[3，4]，具有降低血黏度、抗血小板聚集、抗血栓形成、扩血管、抗炎、抗氧化应激和抗心肌缺血等多途径、多靶点的作用[5-7]，而其中重要的活性成分丹酚酸B和阿魏酸被证实具有降低2型糖尿病大鼠模型的血糖，调节血脂，改善IR的作用[8，9]，故推测冠心宁片对心血管疾病的防治作用与其改善IR的功能有关。猪的心血管系统和脂质代谢结构与人类极为相似，西藏小型猪在高脂诱导下可产生慢性炎症和胰岛素抵抗[10，11]。因此，本实验拟通过高脂饲料诱导的西藏小型猪IR模型，观察冠心宁片对西藏小型猪IR模型的干预作用。
1.1 实验动物：普通级4～5月龄雄性西藏小型猪，体重为8～14kg，16只，购自南方医科大学[SCXK（粤）2011-0015]。饲养于浙江中医药大学动物实验研究中心普通级小型猪实验室[SYXK(浙)2013-0184]，环境温度（22±2）℃，相对湿度：40%～65%，光照：12h/12h明暗交替；
自由饮水；
并按实验动物使用的“3R”原则给以人道主义关怀。
1.2 药物：冠心宁片，国药准字：Z20150028，性状：薄膜片剂，橘黄色，规格：0.38g/片（相当于冠心宁浸膏粉0.27g），由正大青春宝药业有限公司提供。
1.3 检测试剂：血糖（GLU）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）；
由德赛诊断系统（上海）有限公司生产。胰岛素（INS）、脂联素（Adiponectin）、瘦素（Leptin）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）等ELISA试剂盒，均购于南京建成生物工程研究所。
1.4 造模和分组：取健康4～5月龄雄性西藏小型猪16只，按体重随机分为正常对照组4只、IR模型组12只，进行高脂饲料（1.5%胆固醇、15%油脂、10%蛋黄粉、73.5%基础饲料）饲喂，造模后8周时根据空腹血糖均匀分成模型对照组和冠心宁片组，每组6只，冠心宁片组每日给予81mg/kg的冠心宁片，连续给药8周。除正常对照组饲喂普通饲料外，其他组继续饲喂高脂饲料。所有动物日粮均按体重的2.5%饲喂，1日2次，每2周调整饲喂量。
1.5 指标检测：给药结束后，①禁食12小时，取前腔静脉血，分离血浆检测 TC、TG、HDL-C、LDL-C、空腹血糖（FBG）；
并取1mL乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝血，在全自动血液分析仪上测定白细胞（WBC）、单核细胞（MONO）、中性粒细胞（NEUT）；
ELISA法检测血浆INS、Leptin、hs-CRP。利用稳态模型指数计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）和胰岛素敏感指数（HOMA-IS），计算公式为HOMA-IR=FBG×INS/22.5，HOMA-IS=1/（FBG×INS）。②禁食16小时，静脉内注射50%葡萄糖注射液1mL/kg，2min内注射完毕，取血测定给糖前（0min）、给糖后5min、15min、30min、60min、90min、120min时的血糖，同时计算血糖曲线下面积（AUC）。
2.1 冠心宁片对IR模型西藏小型猪血脂血糖的影响：见表1。模型对照组GLU、TC、HDL-C和LDL-C均显著上升（P＜0.05，P＜0.01），连续8周给予冠心宁片后，血糖和血脂指标均呈下降趋势（P＞0.05）。
表1 冠心宁片对IR模型西藏小型猪血糖和血脂的影响（±s,mmol/L）
表1 冠心宁片对IR模型西藏小型猪血糖和血脂的影响（±s,mmol/L）
注：与正常对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。
组别正常对照组模型对照组冠心宁片组LDL-C（mmol/L）0.91±0.13 7.15±0.77##5.51±0.79例数4 6 6 GLU（mmol/L）4.52±0.30 5.84±0.35#4.98±0.32 TC（mmol/L）1.91±0.20 11.50±1.13##9.25±1.14 TG（mmol/L）0.20±0.05 0.19±0.04 0.12±0.04 HDL-C（mmol/L）0.80±0.12 2.53±0.23##2.44±0.13
2.2 冠心宁片对西藏小型猪IR模型WBC、MONO和NEUT的影响：见表2。模型对照组西藏小型猪WBC、MONO和NEUT水平均显著上升（P＜0.05，P＜0.01）；
连续8周给予冠心宁片后，WBC与 MONO显著下降（P＜0.05，P＜0.01），且NEUT水平亦有下降趋势（P＞0.05）。
表2 冠心宁片对IR模型西藏小型猪血液学影响（±s，109/L）
表2 冠心宁片对IR模型西藏小型猪血液学影响（±s，109/L）
注：与正常对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；
与模型对照组相比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
NEUT 2.29±0.08 8.22±1.74#5.79±1.20组别正常对照组模型对照组冠心宁片组例数4 6 6 WBC 13.83±1.45 19.42±1.36#16.08±0.39*MONO 0.39±0.07 1.02±0.07##0.73±0.02**
2.3 冠心宁片对IR模型西藏小型猪hs-CRP和瘦素的影响：见图1。模型对照组西藏小型猪血浆hs-CRP显著上升（P＜0.05），连续8周给予冠心宁片后，hs-CRP显著下降（P＜0.05），且血浆瘦素也有下降趋势（P＞0.05）。
图1 冠心宁片对IR西藏小型猪hs-CRP和瘦素的影响（±s）
2.4 冠心宁片对西藏小型猪IR模型糖耐量的影响：模型对照组在注射50%葡萄糖注射液后5min、15min和30min时血糖显著上升（P＜0.05），且AUC显著增加（P＜0.05）；
连续8周给予冠心宁片后，在注射50%葡萄糖注射液后各时间点的血糖呈下降趋势（P＞0.05），AUC亦有降低趋势（P＞0.05），见图2。
图2 冠心宁片对IR模型西藏小型猪糖耐量的影响（±s）
2.5 冠心宁片对IR模型西藏小型猪胰岛素水平和胰岛素敏感性的影响：模型对照组血浆胰岛素水平和HOMA-IR指数显著升高（P＜0.01），HOMA-IS指数显著降低（P＜0.01）。连续8周给予冠心宁片后，胰岛素含量及HOMA-IR指数均显著降低（P＜0.05，P＜0.01），HOMA-IS指数显著升高（P＜0.01），见表3。
表3 冠心宁片对IR模型西藏小型猪胰岛素水平及HOMA指数的影响（±s）
表3 冠心宁片对IR模型西藏小型猪胰岛素水平及HOMA指数的影响（±s）
注：与正常对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；
与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
HOMA-IS 13.81±0.95 4.40±0.54##9.65±1.21**组别正常对照组模型对照组冠心宁片组例数4 6 6 INS(ng/mL)17.36±1.11 44.44±6.04##22.53±2.30**HOMA-IR 3.26±0.21 11.22±1.91##5.00±0.65*
IR是一种复杂的代谢异常性疾病，影响外周组织对胰岛素的利用能力，使胰岛素敏感性降低，从而影响葡萄糖的利用，导致高血糖或代偿性高胰岛素血症的发展[12]。高脂饮食会降低胰岛素相关靶组织的胰岛素敏感性[13]，并导致血脂异常，而血脂紊乱是IR的重要病理特征。长期高脂饮食会使β细胞受到损害，抑制胰岛素释放，是诱导IR的常用方法。本实验通过高脂诱导后，模型组血脂代谢和糖耐量异常，血糖、胰岛素水平及HOMA-IR显著升高，HOMA-IS显著降低，说明高脂诱导后西藏小型猪出现明显的胰岛素抵抗。而连续8周给予冠心宁片后，血糖和胰岛素水平及HOMA-IR显著下降，HOMA-IS显著提高，脂质代谢得到改善，表明冠心宁片具有抗胰岛素抵抗的作用。
炎症因子是触发IR的主要因素，在IR的病理发展中起到了重要的媒介作用。炎症与IR相互联系，加速病变进程，且细胞因子引起的炎性反应可能介导糖尿病患者中INS、FBG等指标的变化[14]。hs-CRP是一种公认的炎症标志物，在2型糖尿病患者中发现hs-CRP的水平随着血糖的升高而持续上升，与胰岛素分泌水平呈正相关[15]。本实验发现模型组hs-CRP和WBC、MONO和NEUT水平显著上升，说明炎症因子大量参与到IR病理过程中。炎性反应与糖脂代谢紊乱相互促进形成恶性循环，加重IR[16]。hs-CRP水平显著下降，并显著降低WBC与MONO水平，表明冠心宁片具有抗炎作用。
综上所述，高脂诱导能使西藏小型猪产生明显的胰岛素抵抗；
而冠心宁片能通过调控脂质代谢、增加胰岛素敏感性、改善糖耐量异常和抑制炎症等途径，改善IR，但具体机制还有待于进一步研究。